Se hai mai acquistato un peptide sintetico per un esperimento di laboratorio, probabilmente avrai notato una percentuale di purezza indicata nel certificato di analisi (COA), spesso valori come 95 %, 98 % o persino 99 %. Ma cosa rappresentano realmente questi numeri?
La purezza del peptide è un parametro di qualità fondamentale che indica quale frazione del campione corrisponde al peptide desiderato rispetto ai sottoprodotti indesiderati. In termini semplici, un peptide dichiarato al 95 % di purezza contiene principalmente il peptide target (95 %), mentre il restante ~5 % è composto da impurità. Queste possono includere sequenze troncate o accorciate, varianti per delezione, residui ossidati o altri sottoprodotti minori del processo di sintesi.
Un’elevata purezza è importante perché anche piccole quantità di contaminanti possono interferire con i risultati sperimentali o con la loro interpretazione. Questo articolo spiega come viene misurata la purezza dei peptidi, perché è distinta dall’identità del peptide, cosa rappresentano i livelli di purezza più comuni (95 %, 98 %, 99 %) e cosa significa realmente “grado di ricerca” per i reagenti peptidici.
Che cos’è la purezza del peptide nella ricerca?
La purezza del peptide indica la percentuale del campione costituita dalla sequenza completa e corretta del peptide, priva di altre impurità correlate ai peptidi. Ad esempio, una purezza del 98 % significa che il 98 % del materiale peptidico è il prodotto desiderato, mentre il restante 2 % può essere composto da residui indesiderati della sintesi (come sequenze incomplete o varianti per delezione di amminoacidi).
È importante sottolineare che questa percentuale di purezza viene generalmente determinata dopo la purificazione (ad esempio tramite HPLC) e si riferisce esclusivamente alle impurità peptidiche. Non include acqua residua, sali o controioni presenti nella polvere secca del peptide. In altre parole, la percentuale di purezza descrive la composizione delle specie peptidiche nel campione, non il contributo in peso di acqua o sali.
Per la maggior parte delle applicazioni di ricerca, un’elevata purezza garantisce che la stragrande maggioranza delle molecole nel flacone sia il peptide corretto, contribuendo a una migliore coerenza e riproducibilità sperimentale.
Mantenere un alto livello di purezza è essenziale perché le impurità possono influenzare i bioassay o le reazioni. Ad esempio, peptidi troncati o chimicamente modificati possono legarsi ai bersagli biologici o produrre effetti collaterali che confondono i risultati. L’uso di peptidi altamente purificati riduce questi rischi e migliora l’affidabilità dei dati.
Come viene misurata la purezza dei peptidi? (HPLC e spettrometria di massa)
La misurazione della purezza dei peptidi avviene solitamente tramite cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC), spesso abbinata alla spettrometria di massa (MS) per la verifica dell’identità. Queste tecniche analitiche rappresentano lo standard nel controllo qualità dei peptidi e accompagnano quasi sempre un ordine di peptidi per la ricerca.
HPLC a fase inversa (RP-HPLC):
È il metodo principale per valutare la purezza. Il risultato è un cromatogramma in cui ogni picco rappresenta un componente della miscela. La percentuale di purezza viene calcolata integrando l’area del picco principale rispetto all’area totale di tutti i picchi rilevati. Un singolo picco dominante indica un’elevata purezza.
Spettrometria di massa (MS):
Mentre l’HPLC quantifica la purezza, la MS conferma l’identità del peptide misurandone la massa molecolare. La corrispondenza tra la massa osservata e quella teorica conferma che il componente principale è il peptide corretto.
Insieme, queste analisi forniscono una solida conferma di purezza e identità.
Purezza vs identità: comprendere la differenza
La purezza indica quanto del campione è costituito dal peptide target; l’identità conferma quale molecola è effettivamente presente. Entrambe sono informazioni complementari e necessarie. Un peptide può essere puro al 99 %, ma non corretto dal punto di vista della sequenza se l’identità non viene confermata tramite MS.
Cosa significano i livelli di purezza 95 %, 98 % e 99 %?
-
95 % di purezza:
Adatto alla maggior parte delle applicazioni di laboratorio. Offre un buon equilibrio tra qualità e costo. -
98 % di purezza:
Utilizzato in studi sensibili in cui anche tracce di impurità possono influenzare i risultati. -
99 % di purezza:
Livello estremamente elevato, riservato a standard di riferimento, applicazioni critiche o studi preclinici avanzati.
Cosa significa “grado di ricerca”?
Il termine “grado di ricerca” indica che il peptide è destinato esclusivamente all’uso in laboratorio. Non è prodotto secondo standard GMP e non è approvato per uso umano. Tuttavia, questi peptidi presentano spesso un’elevata purezza chimica e sono accompagnati da documentazione analitica (HPLC e MS).
La differenza principale tra grado di ricerca e grado GMP è di natura regolatoria, non chimica. I peptidi di grado di ricerca sono ideali per studi in vitro e su modelli animali e sono sempre etichettati come Research Use Only (RUO).
Conclusione
Comprendere i livelli di purezza dei peptidi consente di prendere decisioni informate in ambito di ricerca. La purezza indica quante molecole del campione sono effettivamente il peptide corretto, mentre HPLC e MS garantiscono qualità e identità. I peptidi di grado di ricerca offrono un’elevata affidabilità per gli studi scientifici, purché utilizzati esclusivamente in ambienti di laboratorio controllati.
Anche i peptidi ad alta purezza possono produrre risultati incoerenti se vengono ricostituiti in modo errato o gestiti in modo improprio.
Ricostituzione dei peptidi — Tamponi, tecniche e protocolli sicuri per il laboratorio